VGCC 抗體標(biāo)本的采集及保存
更新時間：2022-08-28 點擊次數(shù)：369次
探討血清電壓門控鈣通道(voltage-gated calcium channel， VGCC)在帶狀疤疹中的意義，為臨床更好的治療帶狀疤疹(herper zoste，HZ)以及預(yù)防帶狀皰疹后神經(jīng)痛(post herpetic neuralgia，PHN)的發(fā)生提供理論依據(jù)。方法：收集帶狀疤疹患者50例，在人院、出院當(dāng)天采用視覺模擬評分法(visual analoguescale， VAS)進(jìn)行疼痛評分及ELISA法檢測血清中VGCC抗體的濃度，于出院后1月隨訪是否發(fā)生PHN。檢測20例健康志愿者血清VGCC抗體的濃度為對照。
VGCC 抗體應(yīng)用雙抗體夾心酶標(biāo)免疫分析法測定標(biāo)本中VGCC水平。用純化的抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入VGCC抗原、生物素化的抗人VGCC抗體、HRP標(biāo)記的親和素，經(jīng)過*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成黃色。顏色的深淺和樣品中的VGCC呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，計算樣品濃度。
VGCC 抗體標(biāo)本的采集及保存：
1.細(xì)胞培養(yǎng)物上清：請離心后收集上清，并將標(biāo)本保存于-20℃，且應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2.血清：標(biāo)本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000xg離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)?biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
3.血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2-8°C 1000xg離心15分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
注：標(biāo)本溶血會影響檢測結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項檢測。
4.組織勻漿：將動物的組織標(biāo)本先用PBS洗滌，去除多余血液，勻漿化后放在20mIPBS中于-20° C放置過夜，第二天，經(jīng)過二次反復(fù)凍融破膜，將勻漿物5000xg離心5分鐘，取上清即可檢測。
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